Молекулярная диагностика внезапных и необъяснимых смертей от C0 19: коварное

budetlyanin108 — 21.09.2023

Следующая статья представляет собой краткое изложение 23 вскрытий внезапных и необъяснимых смертей. Особого внимания заслуживают описанные случаи смерти детей, смерть которых изначально была классифицирована как СВДС (синдром внезапной детской смерти). Все анализы проводились на кафедре судебной медицины и судебной генетики Поморского медицинского университета в Щецине. Аутопсийные анализы были расширены и теперь включают диагностику вируса SARS-CoV-2 с использованием молекулярных методов и подробный гистопатологический анализ легочной ткани. Материалом для молекулярных исследований служили мазок из носоглотки, взятый посмертно, и гомогенат легочной ткани. В обоих случаях, Для диагностики использовался метод RT-PCR с анализом точки отсечения CT. Во всех проанализированных случаях в легких наблюдался массивный застой, повышенная хрупкость и сплоченность. Испытанный материал показал наличие вируса SARS-CoV-2, что указывало на различные стадии заражения. Было замечено, что чем выше экспрессия вируса в легких, тем ниже или необнаружимым он был в мазке из носоглотки. Это может объяснить ложноотрицательные результаты прижизненных мазков. Интересный вывод заключается в том, что детская смертность, классифицированная как СВДС, также свидетельствует о наличии вируса. Это может стать новым направлением исследований.

3. Результаты

3.1. Результаты патологии

Легкие были макроскопически изменены и имели повышенную сплоченность. Практически во всех случаях паренхима легких была массивно гиперемирована, при пальпации имела повышенную хрупкость. На поверхности легких имелся небольшой локализованный отек темного цвета (пунктир), характерно пересекающий поверхности ( рисунок 1 ), с небольшими кровоизлияниями в отдельных местах ( рисунок 2 ).

Рисунок 1. Массивный застой легочной ткани, расширенные капилляры — ребенок 7 лет (источник: проф. Мирослав Парафинюк).

Рисунок 2. Массивная гиперемия, макрофагальная инфильтрация (источник: проф. Мирослав Парафинюк).

В гистологической картине легочной ткани преобладали массивная гиперемия и отечные изменения альвеол, расширение капиллярных сосудов. Обычно наблюдалось диффузное альвеолярное повреждение (DAD). Отложения фибрина и скопления макрофагов также визуализировались ( рис. 2 ) как экстравазация крови из воздушного пространства легких. В некоторых случаях в альвеолах наблюдались признаки фиброза ( рис. 3 ).

Рисунок 3. Фиброз легочной ткани в результате хронического воспалительного процесса. Визуализация с помощью многоканального микроскопа Zeiss (Набор фильтров 25 Zeiss, Возбуждение TBP 400+495+570, Эмиссионное TBP 460+530+625). Зеленовато-серые структуры, видимые на рисунке, представляют собой фиброзную ткань легких. (Источник: проф. Мирослав Парафинюк).

Такие изменения наблюдались в острой фазе инфекции. Скорее всего, это и стало причиной дыхательной недостаточности (через 24 ч после выявления инфекции).

Эти изменения могут также указывать на хронический воспалительный процесс. Эти процессы приводят к образованию характерной легочной ткани, которую можно сравнить с сотами. Молекулярные тесты подтвердили заражение вирусом SARS-CoV-2. Таким образом, можно сказать, что у всех умерших выявлена ​​хроническая двусторонняя пневмония. Это случаи, когда продуктивные изменения доминировали и возникали у больных через несколько недель после заражения, приводя к дыхательной недостаточности. Механизм смерти был иным, чем в острой фазе COVID-19.

Изменения выявлены при гистологическом исследовании. Пробы отбирали только из макроскопических растворов. Собранные легкие фиксировали в 10% забуференном формалине, а затем заливали в парафин (FFPE). Блоки разрезали на микротоме, окрашивали (ГЭ, гематоксилин-эозин), а затем препарат просматривали под увеличением. Различные изображения были подвергнуты соответствующим патологоанатомам Zeiss, что позволяет осуществлять дальнейшие тонкие изменения структуры (набор фильтров, 25 параметров Zeiss, возбуждение TBP 400 + 495 + 570, излучение TBP 460 + 530 + 625).

3.2. Генетические результаты
Результаты генетических тестов методом RT-PCR представлены в таблице 1 .Исследуемые образцы гомогенатов легочной ткани и посмертные мазки из носоглотки показали наличие РНК вируса SARS-CoV-2. Порог цикла CT относится к числу циклов, необходимых для амплификации вирусной РНК до достижения обнаружимого уровня. Высокое значение КТ не может точно определить инфекционный потенциал пациента [ 29 , 30 , 31].]. Значение КТ мы использовали как показатель положительного результата, что может свидетельствовать о распространении вируса в организме. Среднее время от смерти до вскрытия составило около 14 дней. Во всех проанализированных случаях образцы оказались положительными на наличие генетического материала РНК вируса SARS-CoV-2, несмотря на то, что до проведения вскрытия тела хранились в холодильном хранилище при температуре 4 °C. Такая температура хранения трупа обеспечивает торможение прогресса разложения тела и прогрессирующих процессов гниения. Четыре из проанализированных случаев составили смерть детей в возрасте от 2 месяцев до 7 лет. Пока говорят, что дети восприимчивы к инфекции SARS-CoV-2, но течение заболевания лёгкое [ 32] .]. Такой подход означал, что детей в возрасте до 12 лет практически не тестировали так часто, как взрослых. Анализируемый нами случай с 7-летней девочкой показывает, что такой подход неверен. Ребенок находился на карантине вместе со своей матерью, у которой был положительный тест RT-PCR на SARS-CoV-2. В течение примерно 14-дневного карантинного периода у ребенка был отрицательный результат теста RT-PCR. Примерно через 30 дней после подтверждения заражения матери девочка, у которой не было никаких клинических симптомов, утром скончалась. Характерные изменения легких и молекулярное тестирование показали наличие генетического материала вируса SARS-CoV-2 как в легких, так и в носоглотке при отсутствии гена S в мазке из носоглотки. Анализируя случай 2-месячного ребенка, результаты мазков из носоглотки подтвердили наличие вируса по всем протестированным генам (N, S и ORF). Отсутствие экспрессии в легких может указывать на начальную стадию инфекции SARS-CoV-2. Аналогичная зависимость имеет место и в случае с 14-месячным ребенком. Эффективность RT-PCR-тестов тесно связана с анализируемым материалом и временем, прошедшим с момента появления первых симптомов. Через 10 дней с момента появления симптомов результаты мазка из носоглотки могут быть ложноотрицательными, и шансы на положительный результат снижаются [ 33] .]. Экспрессия как в легких, так и в носоглотке присутствует в материале, взятом у 7-летнего и 3-месячного ребенка. В обоих случаях ген ORF в носоглотке не обнаружен. Наличие вируса SARS-CoV-2 в легких может указывать на тяжесть заболевания COVID-19. В восьми случаях «выпал» один из генов, в том числе ген ORF в семи случаях и ген S в одном случае. Это связано с мутацией вируса SARS-CoV-2. В случае новых мутаций они имеют на 70% большую инфекционную способность. Это связано с тем, что организм человека после попадания вируса начинает вырабатывать антитела. Поэтому вирус начинает менять состав своей оболочки, чтобы избежать распознавания клетками-хозяевами. Это может быть связано со скрытым течением заболевания, что, в свою очередь, приводит к летальному исходу. В девяти проанализированных случаях (образцы №6, 7, 9, 10, 16, 17, 20, 21 и 23) генетический материал вируса SARS-CoV-2 в носоглотке не обнаружен, но обнаружен в гомогенате легочной ткани. Среднее значение КТ составляло от 25 до 37. Это может указывать на продолжающуюся хроническую инфекцию COVID-19. В таких случаях у больного нет характерных симптомов заболевания или их мало (насморк, легкая простуда). Хроническая инфекция, как и в анализируемых случаях, приводит к летальному исходу. Такая картина заболевания может привести к тому, что у пациента будет получен ложноотрицательный результат ОТ-ПЦР на вирус SARS-CoV-2 при наличии активной инфекции в легочной ткани, что может привести к летальному исходу. В случае образца № 12 генетический материал был обнаружен только в мазке из носоглотки, и это были только ORF и ген N. Это может указывать на активную инфекцию. В остальных случаях генетический материал обнаруживался как в носоглотке, так и в легочной ткани. К аналогичным выводам пришли и другие исследователи [34 , 35 ]. Их исследования подтверждают наш анализ о том, что вирус SARS-CoV-2 обнаруживается посмертно.

4. Дискуссия
Наши наблюдения позволяют сделать вывод, что во всех случаях причиной смерти стал вирус SARS-CoV-2. Полученные результаты молекулярного тестирования и гистопатологические анализы указали на заболевание COVID-19. У детей раннего возраста есть подозрение, что хроническая вирусная инфекция может перекрываться с СВДС, что подтверждается характерной легочной картиной в описанных случаях у детей раннего возраста. Вскрытия пожилых людей также показали картину хронического воспалительного процесса и даже фиброза легочной ткани. Существуют исследования влияния вируса SARS-CoV-2 на сердечную мышцу [ 36 ]. Пандемия значительно перегрузила глобальную службу здравоохранения и судебно-медицинское сообщество [ 37 , 38 ]. В ссылках [ 30 , 31 ] Это способствовало тому, что Министерство здравоохранения Италии выпустило рекомендации об отказе от вскрытий лиц с подозрением на COVID-19 [ 39 , 40 ]. Аутопсийные исследования чрезвычайно важны в когнитивном патофизиологическом процессе. Они также оказались ценными для понимания механизма смерти в результате COVID-19 [ 41 ]. Они позволили предотвратить и контролировать эпидемию [ 26 , 33]. Они также способствовали пониманию процессов нарушения свертываемости крови, наблюдаемых при COVID-19 [ 42 ]. В ссылках [ 24 , 25 , 27 , 29 , 30 , 37 , 38 , 43 ] предыдущие аутопсийные исследования людей, умерших от COVID-19, показали наличие генетического материала вируса в трупах, сохраняющееся до нескольких дней [44 ] . Исследования, подобные нашим, показали, что вирус сохранялся до 35 часов в мазках из носоглотки, полученных при вскрытии [ 19 ]. Наше исследование подтверждает эти наблюдения. ICMR (Индийский совет медицинских исследований) определил базовый диапазон КТ для облегчения диагностики инфекции SARS-CoV-2. При значениях более 35 CT результат считается отрицательным. Значение между 25–35 CT указывает на умеренную вирусную нагрузку и трансмиссивность; значения ниже 25 CT предполагают высокую вирусную нагрузку и сильную предрасположенность к передаче инфекции [ 45]. Стандартом диагностики COVID-19 является RT-PCR-тест, чаще всего выполняемый с помощью мазка из носоглотки. Однако могут иметь место ложноотрицательные результаты. В нашем исследовании при анализе случая мужчины 67 лет мазок из носоглотки дал отрицательный результат, тогда как мазок из легких того же человека оказался положительным. Это может свидетельствовать о том, что отсутствие вируса SARS-CoV-2 на слизистых оболочках носа и горла не означает отсутствия инфекции. Поэтому пациент может получить ложноотрицательный результат при жизни. Концентрация вирусной РНК в верхних дыхательных путях достигает пика незадолго до или сразу после появления симптомов, а также колеблется в течение дня. На более поздних стадиях инфекция снижается экспоненциально [ 37]. В течение первых нескольких дней после начала инфекции размножение вируса в верхних дыхательных путях достигает наибольших значений. В гортани, трахее и бронхах также происходит независимая репликация. SARS-CoV-2 можно обнаружить от нескольких дней до нескольких недель после появления первых симптомов [ 38 ]. Исследование 2020 года показало более низкую чувствительность мазков из носа (63%) и зева (32%), чем бронхоальвеолярного лаважа (93%) и мокроты (72%) [37, 45 ] .]. Повторно отрицательные результаты мазков из зева/носа не являются диагностической достоверностью в случае высокого клинического подозрения на инфекцию SARS-CoV-2. Существует корреляция между положительным результатом ОТ-ПЦР с использованием бронхоальвеолярного лаважа (73%) и компьютерной томографией, характеризующейся типичными для COVID-19 изображениями. Это вызывает сомнения в эффективности использования мазков из носоглотки в качестве стандарта ОТ-ПЦР-диагностики. Однако чувствительность тестов верхних и нижних дыхательных путей зависит от времени, прошедшего с момента заражения. На ранних стадиях заболевания более чувствительны мазки из верхних дыхательных путей; на более поздней стадии такой особенностью характеризуются нижние дыхательные пути [ 38]. Результаты, зафиксированные в расширенном мазке из легких на COVID-19, при более позднем сигнальном ходе отсутствие положительного сигнала для носоглотки является правильным. Использование бронхоальвеолярной процедуры в качестве диагностического стандарта проблематично из-за процедуры инвазивной процедуры [ 30 ]. В восьми из двадцати трёх проанализированных случаев отмечен феномен «выпадения» гена. Коронавирусы обладают широким спектром генетической пластичности. Генетические мутации влияют на вирулентность и восприимчивость к передаче инфекции. SARS-CoV-2 относится к РНК-вирусам, характеризующимся высокой предрасположенностью к мутациям. По оценкам, с момента появления SARS-CoV-2 возникло более 56 000 мутаций, включая делеции и инсерции. Наиболее распространенные мутации касаются гена ORF1ab — 71,3%, гена S (спайк) — 12,8% и гена N (нуклеокапсид) — 4,2% (34). Гены E, RdRp, N и ORF1ab являются мишенями для коммерческих и лабораторных тестовых праймеров и зондов [ 31 ].В представленном исследовании наблюдается различная экспрессия вируса в мазках из носоглотки и легочной ткани. У некоторых пациентов он присутствует в обоих случаях, а у других его обнаруживают либо в мазке из носоглотки, либо в легочной ткани. Обнаружение вируса в эпителиальных клетках легких, а также в дыхательных путях возможно в острую фазу поражения легких у больных с дыхательной недостаточностью. Подобной взаимосвязи не наблюдается при пневмонии в фазе, характеризующейся воспалением ткани, заполняющей альвеолы ​​и бронхиолы [ 29].]. Такую картину легких мы наблюдали в нашем исследовании. Особенно это было выражено у детей. Педиатрические показатели Ct варьируются от 9 до 31 Ct. Дети подвержены высокой вероятности заражения SARS-CoV-2, течение которого характеризуется менее выраженными симптомами, чем у взрослых. Было подозрение, что низкие уровни вируса SARS-CoV-2 у детей способствуют ложноотрицательным результатам ОТ-ПЦР, а недиагностированные педиатрические пациенты являются резервуаром вируса [32 ] .В исследовании 2021 года [ 29 ] изучалась эффективность RT-PCR диагностики у детей с низкими титрами вируса SARS-CoV-2. Материал забирали из носоглотки детей и взрослых в среднем через 6 дней от появления симптомов. Результаты ОТ-ПЦР у детей были отрицательными, но серологические тесты, проведенные через шесть недель, показали инфекцию SARS-CoV-2 [ 29 ]. Однако доказательств, подтверждающих связь между возрастом и вирусной нагрузкой, недостаточно. Значения КТ для детей сопоставимы со значениями для взрослых [ 44 ]. Исследование начала 2020 года [ 32] также подтверждает схожий характер результатов у взрослых и детей, а также указывает на регистрацию гораздо большего количества генетического материала вируса у детей до 5 лет [32 ] . Концентрация вирусной РНК в верхних дыхательных путях достигает максимума незадолго до или сразу после появления симптомов, а также колеблется в течение дня.  Целью нашего исследования было оценить полезность молекулярных тестов на SARS-CoV-2 посмертно. Тест подтвердил наличие генетического материала посмертного вируса, который мог представлять потенциальный риск заражения. Различные значения КТ наблюдались для мазков из носоглотки и легочной ткани. Стоит также подчеркнуть, что природа этих смертей не была ясна. На момент вскрытия у нас не было клинических данных, которые бы указывали на наличие заболевания COVID-19 у умершего. Лишь воспалительная картина легочной ткани, повторение во всех проанализированных случаях побудило нас провести молекулярную диагностику. Это показывает, как мало мы еще знаем об этом вирусе. Насколько коварным может быть течение инфекции. Насколько может ухудшиться состояние больного, который может даже не знать об инфекции. Во времена постоянного риска строгое соблюдение протоколов безопасности и стандартных процедур COVID-19 имеет важное значение [ 47]. Результаты нашего исследования показывают, что стоит проводить посмертную молекулярную диагностику на предмет COVID-19, поскольку это позволит шире взглянуть на причину смерти, а также на дальнейшее распространение вируса. Ограничение обмена инфицированными телами с семьей и ускорение захоронения значительно снизят этот риск. Сравнение результатов молекулярных тестов с макроскопическими и гистопатологическими изображениями тканей представляется необходимым и должно оставаться предметом исследований. Наличие этого вируса в трупе, хранившемся в холодильнике в течение сравнительно длительного времени после смерти, доказывает высокую устойчивость и вирулентность вируса SARS-CoV-2. Однако, хотим отметить, что полученные положительные результаты молекулярного теста не являются показанием к рутинным патологоанатомическим диагностическим процедурам и не всегда определяют основную причину смерти. Поэтому они не должны быть единственным источником анализов, а должны лишь дополнять гистологические и токсикологические исследования, например, с целью дачи заключений по уголовным делам. COVID-19 – коварное заболевание, в результате которого клиническая картина больного меняется в короткие сроки. Наблюдающаяся массивная гиперемия легочной ткани в результате хронического воспаления вызывает значительное расширение капилляров, снижение их периферического тонуса, замедление кровотока и, как следствие, остановку газообмена и смерть. Мы полагаем, что посмертная молекулярная диагностика вируса SARS-CoV-2 должна дополнять весь анализ аутопсии. Смерти детей дают информацию о том, что заболевание COVID-19 у детей имеет совершенно иное течение, чем предполагалось изначально. Исследование привело к еще одному размышлению. Аналогичная картина наблюдается и при СВДС у младенцев. Проверка этой гипотезы требует дальнейших обширных исследований в более широком масштабе.

5. Выводы
В ходе исследования наблюдались различия в экспрессии вируса в мазках из носоглотки и легочной ткани. У некоторых пациентов вирус был обнаружен в обоих случаях, а у других – только в одном, особенно в острой фазе поражения легких. Этот феномен был особенно заметен у детей, у которых высока вероятность заражения, но часто наблюдаются более легкие симптомы. Низкие уровни вируса у детей могут привести к ложноотрицательным результатам тестов, что потенциально может сделать их источником невыявленных инфекций.

https://www.mdpi.com/2075-4418/13/18/2980

Важное исследование, которое говорит о том на сколько важна ранняя терапия вне зависимости от результатов теста. Тесты ОТ-ПЦР — это зло! Ложноотрицательных срабатываний практически близко к 50%, а упустить начало заболевания и пик репликации значит столкнуться с возможными осложнениями. Поэтому не гадайте и не успокаивайте себя тем, что это простуда и сама пройдет. Делайте профилактику, используйте назальные спреи и в случае болезни начинайте терапию. И всё будет хорошо! Все ссылки ниже в примечании.

Спасибо всем, кто находит этот пост полезным. Подпишитесь на т/к «Так победим! Статьи»

Примечание: Все сокращение, замены и др. выполнены автором блога и не имеют никакого отношения к публикациям.(обычно в начале публикации и в заголовке). Сделано это по причине цензуры в некоторых соцсетях, которые борются с любым упоминаем ранней терапии и соответствующих лекарств.(в них идет скрин из т/к)

Отказ от ответственности: я не защищаю читателей, употребляющих иве или какие-либо другие препараты. Я не врач, а биохимик по образованию и никому не даю медицинских советов. Прежде чем принимать какие-либо лекарства, всегда консультируйтесь с лечащим врачом, которому доверяете.

ПОМНИТЕ. Вы находитесь под защитой Нюрнбергского кодекса и Хельсинской декларации. Хельсинкская декларация делает центральным документом этической исследовательской деятельности информированное согласие. Декларация определяет не только приемлемость известных и исследованных методов лечения, но принципы лечения больного альтернативными методами, к примеру, параграф 37 призван регулировать случаи, «когда не существует проверенного профилактического, диагностического или терапевтического метода. Когда существующие методы оказываются неэффективными, врач, получив обоснованное согласие пациента, должен иметь право применять непроверенные или новые профилактические, диагностические и терапевтические меры, если, по его мнению, они дают надежду на спасение жизни, восстановление здоровья или могут облегчить страдания. По мере возможности такие меры должны быть исследованы на предмет их безопасности и эффективности. Во всех случаях всю новую информацию следует регистрировать и, при необходимости, публиковать».

Полный текст ХД: https://budetlyanin108.livejournal.com/3489319.html

Подписывайтесь на мою страницу, всегда последние РКИ, КИ, обзор мировой прессы, статьи и рекомендации о передовых методах лечения К19 : https://www.facebook.com/veniamin.zaycev/

Здесь собрано все, что будет вам интересно, все объяснено в закрепленном посте, там же есть и схема-таблица с алгоритмом и применении иве:
https://www.facebook.com/ashominfo

Группа в фб «Так победим!» все вопросы по иве и ранней терапии:
https://www.facebook.com/groups/293522279068895

Телеграм-канал «Так победим!» на случай потери связи, там публикуется то, что идет в ЖЖ и не всегда идет в ФБ:
https://t.me/takpobedimsvz

Чат по иве в телеграме:
https://t.me/takpobedi

ЖЖ: https://budetlyanin108.livejournal.com/

"Книга отзывов"

часть 1: https://budetlyanin108.livejournal.com/3118230.html

часть 2: https://budetlyanin108.livejournal.com/3118949.html

часть 3: https://budetlyanin108.livejournal.com/3211902.html

часть 4: https://budetlyanin108.livejournal.com/3417765.html

Ссылки по детоксикации спайк-белка:

https://budetlyanin108.livejournal.com/3144742.html

https://budetlyanin108.livejournal.com/3260643.html

https://budetlyanin108.livejournal.com/3596796.html

Детокс аутофагией:

https://budetlyanin108.livejournal.com/3613550.html

Назальные спреи

https://budetlyanin108.livejournal.com/3612201.html

РУБРИКАТОР чата Телеграм-канала «Так победим!»

Оставить комментарий

Популярные посты:

scribonianus

Колесные погрузчики XPower Liebherr L 550 и Liebherr L 586

kiowa_mike

Дуглас Престон. Потерянный город обезьяньего бога

inga-ilm

блинчики 14 века

nathoncharova

Как разница в росте влияет на благополучие в браке

morita

Приехали

sinekvan

Поющий фонтан с танцующими струями в Мармарисе

zavodfoto

Мурманский транспортный филиал Норникеля

matsam

Утреннее

iam_krasnoyarsk

Танки КВ-1 в боях за село Непокрытая в мае 1942 года

• Ранее
• Архив