Влияние чая, катехинов и производных катехинов на субварианты 0micr0n SC0V-2
budetlyanin108 — 16.10.2023
Удивительно, но с самого начала пандемии мы в своих схемах настоятельно рекомендовали зеленый чай из-за наличия катехина EGCG или его в качестве добавки. И вот только сейчас выходит публикация в пуле журналов NATURE о положительном влиянии эпигаллокатехина галлата и его производных на субварианты 0микр0на.
***
Субварианты SC0V-2 0micr0n имеют множественные мутации в S-белках и демонстрируют высокую трансмиссивность. Ранее мы сообщали, что чайный катехин (-)-эпигаллокатехин галлат (EGCG) и его производные, включая теафлавин-3,3'-ди-O-дигаллат (TFDG), сильно инактивируют обычный SARS-CoV-2 путем связывания с рецептор-связывающим доменом. (RBD) S-белка. Здесь мы показываем, что подварианты Омикрона эффективно инактивировались зеленым чаем, маття и черным чаем. EGCG и TFDG сильно подавляли инфекционность субвариантов BA.1 и XE, тогда как эффект на BA.2.75 был слабее. Анализ нейтрализации показал, что EGCG и TFDG ингибируют взаимодействие между BA.1 RBD и ACE2. Анализы in silico показали, что мутации N460K, G446S и F490S в RBD решающим образом влияют на связывание EGCG/TFDG с RBD. Здоровые добровольцы употребляли конфеты, содержащие зеленый или черный чай, и слюна, собранная у них сразу после употребления конфет, значительно снижала инфекционность вируса BA.1 in vitro. Эти результаты указывают на специфические аминокислотные замены в RBD, которые решающим образом влияют на связывание EGCG/TFDG с RBD, а также на различную чувствительность каждого субварианта Omicron к EGCG/TFDG. Исследование может предложить молекулярную основу потенциальной полезности этих соединений для подавления мутантных вирусов, которые могут появиться в будущем и вызвать следующую пандемию.
...Мы считали, что инактивация вируса в слюне должна быть важна, и исследовали различные продукты и пищевые ингредиенты, которые инактивируют обычный штамм SARS-CoV-2 16 . Мы сообщили, что воздействие вируса на зеленый чай, жареный зеленый чай, чай улун и черный чай in vitro привело к значительному снижению инфекционности вируса 16 , 17 , 18 . Мы также обнаружили, что катехиновое соединение чая (-)-эпигаллокатехин галлат (EGCG) мощно и быстро инактивирует вирус 16 , 17 , 18 , о чем также сообщили другие группы 19 , 20 , 21 . Аналогичные эффекты наблюдались также у ингредиентов черного чая, галлоилированных теафлавинов (теафлавин-3-О-галлат (TF3G), теафлавин-3'-О-галлат (TF3'G) и теафлавин-3,3'-О-дигаллат ( TFDG)), и теазиненсин А (TSA), которые являются производными катехинов чая 17 , 22 . Мы также сообщили, что EGCG, TFDG и TSA мешают взаимодействию между вирусным шиповидным белком и ACE2 путем связывания с доменом, связывающим рецептор шиповидного белка (RBD). Однако еще предстоит выяснить, инактивируют ли эти чайные ингредиенты также омикроновые варианты SARS-CoV-2. Более того, не выяснено, какие аминокислотные замены в субвариантах Омикрона могут влиять на связывание EGCG и TFDG с белком-шипом.
В этом исследовании мы изучили эффективность чая, чайных катехинов и производных катехина для инактивации субвариантных штаммов Omicron SARS-CoV-2. Мы также оценили, инактивирует ли BA.1 in vitro слюна здоровых добровольцев, которые потребляли конфеты, содержащие зеленый или черный чай.
Снижение инфекционности подвариантов омикрона при лечении чаем
Чтобы оценить, инактивируются ли чаем субварианты Omicron SARS-CoV-2, суспензию вируса подвергали воздействию зеленого или черного чая, который был свежезаварен путем заливки чайных листьев горячей или кипяченой водой, или свежеприготовленного зеленого чая матча путем размешивания порошкообразного чая матча в горячей воде, как при приготовлении обычного напитка (см. « Материалы и методы »). Вирусную суспензию смешивали с исходным чайным напитком до конечной концентрации × 9/10 (90%). Через 10 с смеси чай/вирус серийно разбавляли и подвергали анализу TCID 50 для определения инфекционности вируса. Как показано на рис. 1а , титр BA.1 упал до менее чем 1/100 титра контрольного вируса, обработанного DW, при обработке любым из этих образцов чая. Аналогичные результаты были получены и при использовании других подвариантов.
Между тем, бутилированный зеленый чайный напиток заметно снижал инфекционность BA.1, BA.5 и BQ.1.1, но не делал этого в подварианте BA.2.75. Титры вирусов BA.2 и XE снизились примерно до 1/100 после лечения бутилированным напитком зеленого чая.
Эти результаты не были вызваны искусственными эффектами из-за различных концентраций свежей культуральной среды в лунках или токсическим воздействием чая на клетки VeroE6/TMPRSS2 (дополнительный рисунок S2 ).
EGCG и GCG эффективно инактивировали некоторые, но не все субварианты омикронов.
Мы обрабатывали подварианты Омикрона различными чайными катехинами в течение 10 с и оценивали значения TCID 50 . Катехины содержались в зеленом чае в разных концентрациях. Вирус обрабатывали каждым катехином в той же концентрации в бутылочном напитке зеленого чая, который мы использовали (дополнительная таблица S1 ). Например, для лечения вируса с помощью EGCG концентрацию EGCG доводили до 641 мкМ, что соответствует концентрации EGCG в напитке из зеленого чая в бутылках. (+)-катехин (C), (-)-эпикатехин (EC), (-)-катехин галлат (CG), (-)-эпикатехин галлат (ЭКГ), (-)-галлокатехин (GC) и (- )-эпигаллокатехин (ЭГК) не оказывал существенного влияния на инфекционность всех субвариантов Омикрона в данных экспериментальных условиях (рис. 1 б). Напротив, EGCG и его эпимер, (-)-галлокатехин галлат (GCG), снижали титры вируса BA.1 и XE до менее чем 1/100 и снижали инфекционность BA.2 и BA.2.75 примерно до 1. /10. Эти антивирусные эффекты EGCG были сравнимы или слабее, чем у бутилированного напитка из зеленого чая (рис. 1 a и b).
Мы также исследовали влияние различных концентраций EGCG и GCG на подварианты Омикрона. Как показано на рис. 2а , ЭГКГ в концентрации 1000 мкМ инактивировал более 99% вирусов BA.1 и BA.5, тогда как более 1% вирусов BA.2, BA.2.75, XBB.1 и BQ.1.1 осталось заразен после такого же лечения. Аналогичным образом, GCG в концентрации 1000 мкМ снижал титры вирусов BA.1, XE и XBB.1 до уровня менее 1/100, тогда как его воздействие на BA.5, BA.2.75 и BQ.1.1 было менее сильным со степенью снижения от 1 до 1/100. /10 и 1/100 (рис. 2 б).
фигура 2
Влияние EGCG и GCG на субварианты Омикрона. Субварианты Омикрона обрабатывали указанными концентрациями ЭГКГ ( а ) или GCG ( б ) в течение 10 с. После разведения титры вируса (среднее ± стандартное отклонение) определяли, как показано на рис. 1 (n = 4). ****p <0,0001, ***p <0,001, **p <0,01 и *p <0,05 по сравнению с Ctrl (дистиллированная вода) (критерий множественных сравнений Тьюки).
Влияние теафлавинов на инфекционность субвариантов омикрона
Субварианты Омикрона обрабатывали теафлавинами (TF, TF3G, TF3'G, TFDG) в концентрациях, эквивалентных концентрациям в типичном черном чае (дополнительная таблица S1 ) 17 . Анализ TCID 50 показал, что TFDG заметно снижал титры вирусов BA.1, XE, BA.5, XBB.1 и BQ.1.1, тогда как степень снижения BA.2 и BA.2.75 была менее значительной (между 1/10 и 1/100) (рис. 3 а). TF3G снижал инфекционность BA.1 до <1/100, не влияя на другие варианты Omicron в аналогичной степени. Ни негаллоилированный TF, ни TF3'G не снижали титры вируса менее чем до 1/100.
Рисунок 3
Влияние теафлавинов на субварианты Омикрона. Вирусы обрабатывали каждым соединением в одинаковой концентрации в черном чае ( а ) или указанными концентрациями ТФДГ ( б ) в течение 10 с. После разведения титры вируса (среднее ± стандартное отклонение) определяли, как показано на рис. 1 (n = 4). ****p <0,0001, ***p <0,001, **p <0,01 и *p <0,05 по сравнению с Ctrl (дистиллированная вода) (критерий множественных сравнений Тьюки).
Мы также исследовали инактивационные эффекты различных концентраций TFDG на подвариантах Omicron. Как показано на рис. 3b , TFDG в концентрации 50 или 100 мкМ снижал инфекционность большинства подвариантов до 1/100 или менее, за исключением того, что более 1% BA.2.75 не инактивировалось обработкой 100 мкМ соединение.
EGCG инактивировал вирус, но не сделал клетки устойчивыми к вирусу.
Мы исследовали возможность того, что антивирусный эффект EGCG наблюдался, поскольку EGCG действовал на клетки, а не на вирус. Чтобы прояснить этот момент, мы предварительно обработали клетки EGCG, а затем промыли и заразили вирусом BA.1, обработанным дистиллированной водой (ДВ) (протокол «Пре»). Как показано на фиг. 4а , титр вируса существенно не снизился. Результат резко контрастировал с заметной инактивацией вируса, смешанного с EGCG (протокол «Смешать» на рис. 4а, который представляет собой ту же процедуру, что и на рис. 1b и 2a ). Таким образом, есть основания полагать, что EGCG инактивировал вирус, но не вызывал антивирусного эффекта в клетках.
Рисунок 4
EGCG, GCG и TFDG препятствовали взаимодействию ACE2 и RBD Omicron BA.1. ( a ) Вирус BA.1 и EGCG смешивали, и смесью инфицировали клетки («Смесь»), тогда как другие клетки предварительно обрабатывали EGCG с последующей промывкой и инфицированием обработанным DW вирусом BA.1 («Предварительно »). В качестве контроля (DW) вирус BA.1, обработанный DW, инфицировали необработанные клетки. Титры вируса определяли, как показано на фиг. 1 . ( b – d ) HRP-RBD смешивали с EGCG, и смесь добавляли в лунки, предварительно покрытые ACE2 («Протокол смешивания») ( b , c ), и зеленые столбцы на ( d ), в то время как другие предварительно покрытые ACE2 -Покрытые лунки предварительно обрабатывали EGCG с последующей промывкой и добавлением HRP-RBD, обработанного DW («Протокол предварительной обработки») (розовые столбцы на ( d )). В качестве контроля (DW) в лунки, предварительно покрытые ACE2, добавляли обработанный DW HRP-RBD. Оценивали связывание между RBD и ACE2, и показан % ингибирования для каждого образца. Значения представляют собой средние значения ± стандартное отклонение (n = 3). ****p <0,0001 по сравнению с контролем (DW), NS, p > 0,05 по сравнению с контролем (DW), + + + +p < 0,0001, между указанными группами, по критерию множественного сравнения Тьюки.
EGCG, GCG и TFDG ингибировали взаимодействие BA.1 RBD с ACE2.
Анализ нейтрализации проводили для проверки того, предотвращают ли EGCG, GCG и TFDG взаимодействие между RBD белка Spike BA.1 и ACE2. В результате взаимодействие между RBD и ACE2 было сильно подавлено EGCG, GCG и TFDG, которые были смешаны с RBD с последующим добавлением полученной смеси RBD/соединение в лунки, предварительно покрытые ACE2 («протокол смешивания») (рис. 4 б, в и зеленые столбцы в г). Напротив, взаимодействие белков существенно не ингибировалось, если ACE2 предварительно обрабатывался EGCG перед добавлением RBD, обработанного DW (рис. 4 d, розовые столбцы). Эти данные убедительно свидетельствуют о том, что EGCG ингибирует взаимодействие между RBD и ACE2, связываясь с RBD, а не с ACE2.
...
Обсуждение
Субварианты SARS-CoV-2 Omicron имеют различные мутации в вирусных белках Spike, включая N501Y, E484K, E484Q, L452R 26 , 27 , 28 , 29 , 30 . Эти аминокислотные замены могут быть связаны с высокой контагиозностью и/или ускользанием вариантов от иммунного ответа 26,27 . Мы обнаружили, что все протестированные нами субварианты Омикрона были эффективно инактивированы обработкой зеленым чаем, зеленым чаем матча и черным чаем в течение 10 секунд (рис. 1а ), что согласуется с нашим предыдущим исследованием с использованием обычного SARS-CoV-2. 17 , 18 . Бутилированный зеленый чайный напиток также был эффективен для некоторых подвариантов, тогда как его воздействие на другие подварианты было неудовлетворительным, вероятно, потому, что концентрации катехинов и их производных в этом напитке были относительно низкими по сравнению с зеленым чаем, который заваривали из чайных листьев кипяченой водой. .
Каждый подвариант проявлял различную чувствительность к катехинам и теафлавинам (рис. 1 , 2 , 3 ). Это может быть связано с различными аминокислотными заменами в RBD белка S каждого субварианта. Замена N460K может решающим образом влиять на связывание EGCG с белком RBD Omicron S (рис. 5 ). В соответствии с анализом in vitro, анализ молекулярного докинга in silico показал, что TFDG образует стабильную ассоциацию с Omicron RBD белка S линии BA.2 группы 1' с Y453, F486 и Q493R в патче 1, Y449, Q498R и N501Y в патче 2. Напротив, замена G446S в линии BA.2.75 группы 2' предполагает, что TFDG в основном взаимодействует с патчем 2 (G446S, Y449 и Q498R в патче 2). Мы предполагаем, что замена G446S затрудняет взаимодействие TFDG с патчем 1 Omicron RBD белка S. С другой стороны, в линии XBB.1 Группы 2' замена F490S позволяет взаимодействовать с патчем 1 Omicron RBD белка S (рис. 6 д, е ) . Поэтому мы рассчитали свободную энергию связывания, включая такие вклады, как сольватационные, энтропийные и энтальпийные условия, на основе энергии полярного взаимодействия как взаимодействия TFDG с каждым омикронным RBD S-белка. В результате энергия взаимодействия линии XBB.1 (- 89,67 ккал/моль) слабее, чем у линии BA.2 (- 108,41 ккал/моль) и более существенна, чем у линии BA.2.75 (- 89,13 ккал/моль).
Эти результаты объясняют согласованность экспериментов in silico и in vitro, касающихся ингибирования TFDG связывания Omicron RBD S-белка с ACE2.
Как Хан и др. 25 объяснили ограничения своего исследования, мы также сосредоточились на взаимодействии между Omicron RBD белка S и hACE2 в нашем анализе молекулярного докинга in silico . Следует учитывать, что эти мутации в других участках RBD Omicron белка S также могут влиять на защиту GCG, EGCG и TFDG от вирусной инфекции.
Наше клиническое исследование показало, что вирус BA.1 сильно инактивировался in vitro слюной здоровых добровольцев, которые только что съели конфету, содержащую либо зеленый, либо черный чай (рис. 7 ) . Это согласуется с нашим предыдущим исследованием, согласно которому катехины и производные катехинов инактивируют SARS-CoV-2 даже в присутствии человеческой слюны 18 . Конфеты, содержащие зеленый или черный чай, могут быть полезны для инактивации вируса при употреблении их инфицированными лицами, для снижения вирусной нагрузки в полости рта и желудочно-кишечного тракта инфицированного человека, а также для предотвращения распространения вируса от инфицированных лиц к рядом неинфицированные люди. Сообщалось, что вирус заражает слюну и другие ткани полости рта для размножения 6 , 7 . Однако вирусинактивирующий эффект не был продемонстрирован в слюне, собранной у здоровых добровольцев через 5 и 15 мин после прекращения употребления конфет (рис. 7 ). Это может быть связано с высокой скоростью выделения слюны у здоровых добровольцев 31 .
Эти результаты указывают на специфические аминокислотные замены в RBD Omicron, которые решающим образом влияют на связывание EGCG/TFDG с RBD, а также на различную чувствительность каждого субварианта Omicron к EGCG/TFDG. Исследование может предложить молекулярную основу потенциальной полезности чайных катехинов и их производных в подавлении передачи мутантных вирусов, которые могут появиться в будущем и вызвать следующую пандемию.
...
Чай и химия
Коммерчески доступные листья зеленого чая, порошкообразные листья матча и черного чая были куплены в местном продуктовом магазине. Для приготовления «оригинального чайного напитка» зеленый чай заваривали, заливая 25 мл предварительно нагретой горячей воды (70 °С) 1 г листьев зеленого чая на 2 мин. Зеленый чай матча готовили путем взбивания 1 г порошка матча в 30 мл горячей воды (80°C). Черный чай заваривали, заливая 300 мл кипяченой воды (95–100°С) 10 г листьев черного чая на 2 мин. После заваривания или взбивания все образцы чая фильтровали через ацетатцеллюлозные фильтры с размером пор 0,45 мкм и доводили до комнатной температуры перед использованием. Бутилированный зеленый чайный напиток был коммерческим продуктом компании ITO EN ltd. и куплено в продуктовом магазине (дополнительная таблица S1 ). Химические соединения были приобретены у Nagara Science (Гифу, Япония), как показано в дополнительной таблице S3 .
https://www.nature.com/articles/s41598-023-43563-3
Спасибо всем, кто находит этот пост полезным. Подпишитесь на т/к «Так победим! Статьи»
Примечание: Все сокращение, замены и др. выполнены автором блога и не имеют никакого отношения к публикациям.(обычно в начале публикации и в заголовке). Сделано это по причине цензуры в некоторых соцсетях, которые борются с любым упоминаем ранней терапии и соответствующих лекарств.(в них идет скрин из т/к)
Отказ от ответственности: я не защищаю читателей, употребляющих иве или какие-либо другие препараты. Я не врач, а биохимик по образованию и никому не даю медицинских советов. Прежде чем принимать какие-либо лекарства, всегда консультируйтесь с лечащим врачом, которому доверяете.
ПОМНИТЕ. Вы находитесь под защитой Нюрнбергского кодекса и Хельсинской декларации. Хельсинкская декларация делает центральным документом этической исследовательской деятельности информированное согласие. Декларация определяет не только приемлемость известных и исследованных методов лечения, но принципы лечения больного альтернативными методами, к примеру, параграф 37 призван регулировать случаи, «когда не существует проверенного профилактического, диагностического или терапевтического метода. Когда существующие методы оказываются неэффективными, врач, получив обоснованное согласие пациента, должен иметь право применять непроверенные или новые профилактические, диагностические и терапевтические меры, если, по его мнению, они дают надежду на спасение жизни, восстановление здоровья или могут облегчить страдания. По мере возможности такие меры должны быть исследованы на предмет их безопасности и эффективности. Во всех случаях всю новую информацию следует регистрировать и, при необходимости, публиковать».
Полный текст ХД: https://budetlyanin108.livejournal.com/3489319.html
Подписывайтесь на мою страницу, всегда последние РКИ, КИ, обзор мировой прессы, статьи и рекомендации о передовых методах лечения К19 : https://www.facebook.com/veniamin.zaycev/
Здесь собрано все, что будет вам интересно, все объяснено в
закрепленном посте, там же есть и схема-таблица с алгоритмом и
применении иве:
https://www.facebook.com/ashominfo
Группа в фб «Так победим!» все вопросы по иве и ранней
терапии:
https://www.facebook.com/groups/293522279068895
Телеграм-канал «Так победим!» на случай потери связи, там
публикуется то, что идет в ЖЖ и не всегда идет в ФБ:
https://t.me/takpobedimsvz
Чат по иве в телеграме:
https://t.me/takpobedi
ЖЖ: https://budetlyanin108.livejournal.com/
"Книга отзывов"
часть 1: https://budetlyanin108.livejournal.com/3118230.html
часть 2: https://budetlyanin108.livejournal.com/3118949.html
часть 3: https://budetlyanin108.livejournal.com/3211902.html
часть 4: https://budetlyanin108.livejournal.com/3417765.html
Ссылки по детоксикации спайк-белка:
https://budetlyanin108.livejournal.com/3144742.html
https://budetlyanin108.livejournal.com/3260643.html
https://budetlyanin108.livejournal.com/3596796.html
Детокс аутофагией:
https://budetlyanin108.livejournal.com/3613550.html
Назальные спреи
https://budetlyanin108.livejournal.com/3612201.html
РУБРИКАТОР чата Телеграм-канала «Так победим!»
http://ivermec.space/wiki/doku.php/%D0%B3%D0%BB%D0%B0%D0%B2%D0%BD%D0%B0%D1%8F
|
|
</> |
Телевизор Samsung включается сам по себе 
Зелье красоты 
Наконец то сбежал из этого Рейха 
По Джойсу 
Встретили ежонка на ВДНХ, мамы-ежихи рядом нет 
Леди Луиза с молодым человеком на соревнованиях Sandringham Horse Driving 
26 июня 
Холодный и поэтому солнечный день 
Забавно :-) 
