рейтинг блогов

Спайк SC0V2 нарушает восстановление повреждений ДНК и ингибирует рекомбинацию V

топ 100 блогов budetlyanin10801.11.2021

Наши результаты свидетельствуют о том, что спайковый белок захватывает механизмы восстановления повреждений ДНК и механизмы адаптивного иммунитета in vitro. Мы предлагаем потенциальный механизм, с помощью которого спайковые белки могут нарушать адаптивный иммунитет, подавляя репарацию повреждений ДНК. Хотя не было опубликовано никаких доказательств того, что КВ2 может инфицировать тимоциты или лимфоидные клетки костного мозга, наш репортерный анализ in vitro V (D) J показывает, что спайковый белок интенсивно препятствует рекомбинации V (D) J. В соответствии с нашими результатами, клинические наблюдения также показывают, что риск тяжелого заболевания или смерти от C19 увеличивается с возрастом, особенно у пожилых людей, которые относятся к группе наибольшего риска [ 22]. Это может быть связано с тем, что белки-шипы КВ2 могут ослаблять систему репарации ДНК у пожилых людей и, следовательно, препятствовать рекомбинации V (D) J и адаптивному иммунитету. Напротив, наши данные предоставляют ценные детали об участии субъединиц белка-шипа в репарации повреждений ДНК, указывая на то, что в@кцины на основе шипов полной длины могут ингибировать рекомбинацию V (D) J в В-клетках, что также согласуется с недавним исследование, показывающее, что в@кцина на основе полноразмерных спайков вызвала более низкие титры антител по сравнению с в@кциной на основе RBD [ 28]. Это предполагает, что использование антигенных эпитопов спайка в качестве в@кцины против КВ2 может быть более безопасным и эффективным, чем полноразмерный спайк. Взятые вместе, мы определили один из потенциально важных механизмов подавления КВ2 адаптивного иммунного аппарата хозяина. Кроме того, наши результаты также предполагают потенциальный побочный эффект вак на основе спайков полноразмерных. Эта работа улучшит понимание патогенеза C19 и предоставит новые стратегии для разработки более эффективных и безопасных вак.

Это серьезное ограничение на самом деле.

Ремонт повреждений ДНК, особенно NHEJ, необходим для рекомбинации V (D) J, которая лежит в основе B- и T-клеточного иммунитета [ 9 ]. На сегодняшний день многие одобренные вакцины против КВ2, такие как мРНК-вак и вак на основе аденовируса-C19, были разработаны на основе полноразмерного шипового белка [ 25 ]. Хотя остается спорным вопрос о том, напрямую ли КВ2 инфицирует предшественников лимфоцитов [ 26 , 27 ], некоторые отчеты показали, что инфицированные клетки секретируют экзосомы, которые могут доставлять РНК или белок КВ2 к клеткам-мишеням [ 28 , 29]]. Мы также проверили, снижает ли белок-спайк NHEJ-опосредованную рекомбинацию V (D) J. Для этого мы разработали репортерную систему рекомбинации V (D) J in vitro в соответствии с предыдущим исследованием [ 18 ] ( Рисунок S5 ). По сравнению с пустым вектором, сверхэкспрессия спайкового белка ингибировала RAG-опосредованную рекомбинацию V (D) J в этой репортерной системе in vitro ( Рисунок 4 ).

Рисунок 4. Спайковый белок нарушает рекомбинацию V (D) J in vitro. ( A ) Схема репортерной системы V (D) J. ( B ) Типичные графики проточной цитометрии показывают, что спайковый белок КВ2 препятствует рекомбинации V (D) J in vitro. ( C ) Количественный анализ относительной рекомбинации V (D) J. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3. Статистическую значимость определяли с использованием t- критерия Стьюдента . **** p <0,0001.
Рисунок 4. Спайковый белок нарушает рекомбинацию V (D) J in vitro. ( A ) Схема репортерной системы V (D) J. ( B ) Типичные графики проточной цитометрии показывают, что спайковый белок КВ2 препятствует рекомбинации V (D) J in vitro. ( C ) Количественный анализ относительной рекомбинации V (D) J. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3. Статистическую значимость определяли с использованием t- критерия Стьюдента . **** p <0,0001.

Я взял только небольшой фрагмент из статьи, но он важен еще и потому, что восстановление повреждений ДНК происходит в основном в ядре для обеспечения стабильности генома. Хотя белки КВ2 синтезируются в цитозоле [ 1 ], некоторые вирусные белки также обнаруживаются в ядре, включая Nsp1, Nsp5, Nsp9, Nsp13, Nsp14 и Nsp16 [ 19 ]. Мы исследовали, влияют ли эти локализованные в ядре белки КВ2 на систему восстановления повреждений ДНК клетки-хозяина. Для этого мы сконструировали эти плазмиды экспрессии вирусных белков вместе с плазмидами экспрессии спайков и нуклеопротеинов, которые обычно считаются белками, локализованными в цитозоле. Мы подтвердили их экспрессию и локализацию с помощью иммуноблоттинга и иммунофлуоресценции ( рисунок 1 A и рисунок S1A ). Наши результаты соответствовали результатам предыдущих исследований [19 ]; Белки Nsp1, Nsp5, Nsp9, Nsp13, Nsp14 и Nsp16 действительно локализованы в ядре, а нуклеопротеины в основном локализованы в цитозоле. Неожиданно мы обнаружили обилие белка-шипа в ядре ( рис. 1 А). Ремонт NHEJ и гомологичная рекомбинация (HR) - два основных пути репарации ДНК, которые не только постоянно контролируют и обеспечивают целостность генома, но также жизненно важны для адаптивных функций иммунных клеток [ 9 ]. Чтобы оценить, препятствуют ли эти вирусные белки пути репарации DSB, мы исследовали репарацию сайт-специфического DSB, индуцированного эндонуклеазой I-SceI, с использованием белка прямой повторной зеленой флуоресценции (DR-GFP) и общего-NHEJ-GFP ( EJ5 – GFP) репортерные системы для HR и NHEJ соответственно [ 15 , 16]. Сверхэкспрессия Nsp1, Nsp5, Nsp13, Nsp14 и spike белков снижает эффективность репарации как HR, так и NHEJ ( рис. 1 B – E и рис. S2A, B ). Более того, мы также обнаружили, что сверхэкспрессия Nsp1, Nsp5, Nsp13 и Nsp14 резко подавляла пролиферацию по сравнению с другими изученными белками ( рисунок S3A, B ). Следовательно, ингибирующий эффект Nsp1, Nsp5, Nsp13 и Nsp14 на репарацию повреждений ДНК может быть обусловлен вторичными эффектами, такими как остановка роста и гибель клеток. Интересно, что сверхэкспрессия спайкового белка не влияет на морфологию или пролиферацию клеток, но значительно подавляет репарацию как HR, так и NHEJ ( Рис. 1 B – E, Рис. S2A, B и S3A, B ).

https://www.mdpi.com/1999-4915/13/10/2056/htm

Почему это важно? Мы опять приходим к одному из механизмов ИВЕ. Молекула связывается с доменом рецептора шипа S1 в 6M17 и доменом слияния S2 в 6VXX, ингибируя как связывание рецептора, так и конформационную перестройку при успешном связывании и, таким образом, слияние мембран и начальную инфекцию. После инфицирования молекула выполняет несколько действий в цитозоле. Иве связывается с белками nsp7, nsp8, nsp12 и nsp13, компонентами РНК-зависимого белка РНК-полимеразы, который является неотъемлемой частью репликации вируса. Таким образом подавляется транскрипция РНК и, следовательно, репликация вируса. Иве также действует на фактор ядерной локализации импортина-альфа человека, предотвращая образование гетеродимера импортина альфа-бета (также известного как кариоферин альфа-бета). KPA лучше всего описать как адаптер; он присоединяется к KPB, который поддерживает необходимую конформацию белка для взаимодействия с комплексом ядерных пор и импорта белка-груза в ядро клетки. Дополнительный вирусный белок ORF6 присоединяется к KPA, который затем завершает гетеродимер KPA-KPB и локализует ORF6 на NPC, чтобы блокировать ядерный импорт STAT и IRF3, что блокирует транскрипцию стимулированных интерфероном генов (ISG) для цитозольной противовирусной защиты. Ингибирование образования гетеродимера позволяет этому процессу протекать беспрепятственно и запускать противовирусную передачу сигналов на основе интерферона. 

А чем это опасно? Авторы исследования считают и с ними сложно не согласиться, что например, потеря функции ключевых белков репарации ДНК, таких как ATM, DNA-PKcs, 53BP1 и др., Приводит к дефектам репарации NHEJ, которые ингибируют производство функциональных B- и T-клеток, что приводит к иммунодефициту [ 7 , 9 , 10 , 11 ]. Напротив, вирусная инфекция обычно вызывает повреждение ДНК посредством различных механизмов, таких как индукция продукции активных форм кислорода (АФК) и стресс репликации клетки-хозяина [ 12 , 13 , 14]. Если повреждение ДНК не может быть исправлено должным образом, это будет способствовать усилению патологии, вызванной вирусной инфекцией. Захватывают ли белки КВ2 систему восстановления повреждений ДНК, тем самым влияя на адаптивный иммунитет in vitro? Как оказывается да, захватывают.


Примечание: Все сокращение, замены и др. выполнены автором блога и не имеют никакого отношения к публикациям. Сделано это по причине цензуры в некоторых соцсетях, которые борются с любым упоминаем ранней терапии и соответствующих лекарств.
Подписывайтесь на мою страницу, всегда последние РКИ, КИ, обзор мировой прессы, статьи и рекомендации о передовых методах лечения К19 : https://www.facebook.com/veniamin.zaycev/

Здесь собрано все, что будет вам интересно, все объяснено в закрепленном посте, там же есть и схема-таблица с алгоритмом и применении иве:
https://www.facebook.com/ashominfo

Группа в фб «Так победим!» все вопросы по иве и ранней терапии:
https://www.facebook.com/groups/293522279068895

Телеграм-канал «Так победим!» на случай потери связи, там публикуется то, что идет в ЖЖ и не всегда идет в ФБ:
https://t.me/takpobedimsvz

Чат по иве и ранней терапии в телеграме:
https://t.me/takpobedi

Оставить комментарий



Архив записей в блогах:
Иногда надо все-таки полнее раскрыть мысль (в придачу исправить ошибки) "из этого смогли сделать выводы в начале холодной войны. Союзное руководство очень хорошо поняло, что выиграть технологическую гонку на море и в воздухе - не получится. Армады новейших самолетов и растянувшиеся до ...
Дитя в яслях покорила всех -- воспитательницы не отходят от неё, всё стараются, когда только можно, то схватить на руки, то погладить, то посидеть рядом -- под эгидой мы бдим. Остальные дети разглядывают её словно диковинную игрушку -- трогают за руки, дёргают за ноги и пытаются говорить ...
Любимая всеми мангуста в очередной раз поделилась ценным обывательским мнением о МЦ. Текст уныл и предсказуем (но сколько можно переливать из пустого в порожнее). Однако комментарии к посту жгут, как грицца. "Спасибо, ваш анализ многое объсняет. Недавно в интернете мне попался ...
На одном из форумов обсуждают тему "Мне нравится / не нравится поэма Пушкина "Евгений Онегин"".Как водится, мнения разделились на pro et contra: ЗА:"Собственно, эта банальная история про Онегина, Ленского и Татьяну - всего лишь фон и не ...
Когда деноминация была, то тупо жрать почти нечего было. Ножки буша все помнят? А мороженые сморщеные яблоки? Оптовки, на которые надо ехать, потому что бутылка подсолнечного масла, курица и селедка в магазине шаговой доступности будут стоить как цельный рюкзак жратвы, что купишь на оптовк ...