Клиническое исследование показало, что противопаразитарный препарат ИВЕ снижает
budetlyanin108 — 02.12.2023
Немецкое исследование показало, что «Секреция NS1 вируса денге регулируется с помощью субъединицы импортина β1, контролирующей экспрессию шаперона GRp78 и нацеленной на клинический препарат ивермектин.»
Вирус денге (DENV) является основным патогеном человека. Важным
фактором патогенности является неструктурный белок 1 (NS1),
необходимый для репликации вируса и секретируемый инфицированными
клетками. Клиническое исследование показало, что
противопаразитарный препарат ивермектин снижает уровень NS1 в
крови, не влияя на виремию. Ивермектин воздействует на ядерный
транспорт, связываясь с импортином-α, но неизвестно, как секреция
NS1 у пациентов подавляется этим препаратом. Мы показываем, что
ивермектин нарушает сворачивание и секрецию гликопротеинов
эндоплазматического ретикулума, включая NS1. Протеомный анализ
выявил шапероны, взаимодействующие с NS1, включая GRp78 (белок,
регулируемый глюкозой 78 кДа, также известный как HSPA5 или BIP).
Количество этого шаперона увеличивалось при инфекции DENV за счет
активации ответа развернутого белка (UPR). Ивермектин блокировал
ядерный транспорт транскрипционных факторов, необходимых для UPR,
тем самым нарушая активацию GRp78 и секрецию NS1. Снижение секреции
GRp78 и NS1 также наблюдалось у пациентов, получавших ивермектин.
Эти результаты связывают ядерный транспорт и его ингибирование
ивермектином со сворачиванием и секрецией люминальных
гликопротеинов, включая DENV NS1.
ВАЖНОСТЬ
Вирус денге (DENV) является основным патогеном человека, который
может вызывать геморрагическую лихорадку и шоковый синдром. Одним
из важных факторов патогенности DENV является неструктурный белок 1
(NS1), гликопротеин, секретируемый инфицированными клетками. Здесь
мы изучаем механизм действия широко используемого препарата
ивермектина, используемого для лечения паразитарных инфекций и, как
недавно было показано, снижает уровень NS1 в крови у пациентов,
инфицированных DENV. Мы обнаружили, что ивермектин блокирует
ядерный транспорт транскрипционных факторов, необходимых для
экспрессии шаперонов, поддерживающих сворачивание и секрецию
гликопротеинов, включая NS1. Нарушение ядерного транспорта этих
факторов транскрипции ивермектином или их истощение из
инфицированных клеток ослабляет сворачивание NS1 и, следовательно,
его секрецию. Эти результаты показывают новый механизм действия
ивермектина, который может применяться и к другим флавивирусам.
Заболевания, вызываемые представителями семейства:
- Лихорадка денге
- Японский энцефалит
- Клещевой энцефалит
- Лихорадка Западного Нила
- Энцефалит Сент-Луис
- Жёлтая лихорадка
- Гепатит C
- Лихорадка Зика
(Прим. В.З.)
ВВЕДЕНИЕ
Вирус денге (DENV) является возбудителем лихорадки денге, которая является наиболее распространенным вирусным заболеванием, передающимся комарами, во всем мире, с примерно 100 миллионами симптоматических инфекций каждый год и примерно 20 000 смертей ( 1 ). На основании климатических и социально-экономических прогнозов предполагается, что в 2080 году 60% населения мира будет подвергаться риску заражения денге ( 2 ).
DENV принадлежит к роду Flavivirus семейства Flaviviridae . Это оболочечный вирус с геномом одноцепочечной положительной РНК, который кодирует три структурных белка [капсид (C), оболочка (E) и премембранный (prM)] и семь неструктурных белков (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B и NS5) ( 3 ). Среди этих белков NS1 играет множество ролей в жизненном цикле вируса. С одной стороны, он участвует в репликации РНК и сборке/секреции вирусных частиц ( 4–6 ) ; с другой стороны, он секретируется инфицированными клетками и играет решающую роль в уклонении от иммунитета, противодействуя системе комплемента ( 7 , 8 ). Кроме того, NS1 способствует патогенезу денге, вызывая высвобождение цитокинов, способствующих утечке из сосудов ( 9 ). В инфицированных клетках NS1 синтезируется в виде просветного гликопротеина эндоплазматической сети (ER), который образует стабильные димеры ( 10 ). В частности, NS1 содержит два консервативных сайта N-гликозилирования ( 10–12 ) . Мономер состоит из трех структурных доменов: домена димеризации β-ролла, домена крыла и домена β-лестницы ( 13 ). Кроме того, мономер стабилизирован шестью внутримолекулярными дисульфидными связями. Димер NS1 образуется в результате гомотипического взаимодействия между двумя доменами β-ролла, при этом три димера подвергаются тримеризации, что приводит к образованию кольцевых гексамеров NS1, которые секретируются из инфицированных клеток ( 12 , 14 , 15 ).
В настоящее время не существует одобренных противовирусных препаратов для профилактики или лечения денге; однако реализуется несколько стратегий, нацеленных на вирусные белки ( 16 ). Кроме того, применяются подходы, нацеленные на хозяина (HTA), направленные на лечение панфлавивирусов ( 17 ). В этом отношении недавнее клиническое исследование показало, что лечение пациентов, инфицированных DENV, ивермектином, противопаразитарным препаратом, одобренным Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США, привело к ускоренному выведению NS1 из крови без изменения вирусной нагрузки ( 18 ). Известно, что ивермектин нарушает ядерный транспорт путем связывания с импортином-α ( 19 ) ( рис. 1А ). Груз, содержащий сигнал ядерной локализации (NLS), может связываться с импортином-α, связанным с членом семейства импортина-β кариоферином-β1 (KPNB1, также называемым субъединицей импортина β1). Последний может опосредовать транспорт комплексов карго/импортин-α/KPNB1 в ядро через комплекс ядерной поры. Внутри ядра комплексы диссоциируют, когда KPNB1 связывается с RanGTP, который присутствует в этом компартменте в высоких концентрациях ( 20 ).
Рисунок 1
Поскольку ивермектин подавляет секрецию DENV NS1, который является ключевым фактором патогенности, мы стремились определить, как ядерный транспорт может регулировать секрецию NS1. Мы сообщаем, что ядерный транспорт, нарушенный ивермектином, необходим для экспрессии шаперона 78-кДа глюкозорегулируемого белка (GRP-78; также называемого связывающим иммуноглобулиновым белком [BiP] или белком теплового шока 70-кДа 5 [HSPA5]), который в свою очередь отвечает за сворачивание и секрецию NS1 in vitro и in vivo .
...
ОБСУЖДЕНИЕ
Наши результаты подчеркивают участие ядерного транспорта в секреции DENV NS1 и раскрывают механизм действия IVM на этом пути ( рис. 8 ). Самое главное, наши данные объясняют, как IVM снижает уровни NS1 в плазме у инфицированных пациентов, что мы подтвердили в той же когорте ( 18 ). Инфекция DENV индуцирует UPR ( 26–28 ), что приводит к активации нескольких факторов транскрипции, включая ATF6 и sXBP1. Эти факторы транспортируются в ядро ( 29 ) через комплекс импортин-α/KPNB1, как показано в этом исследовании, и индуцируют активацию нескольких генов, участвующих в сворачивании белков, включая ER-резидентный шаперон GRp78. Этот шаперон способствует сворачиванию люминальных гликопротеинов, включая NS1. Правильно свернутый NS1, с одной стороны, секретируется во внеклеточную среду, а с другой стороны, способствует репликации DENV ( рис. 8 , левая панель). Нарушение ядерного транспорта при лечении IVM или KPNB1 KD снижает ядерный импорт UPR-индуцированных факторов транскрипции, следовательно, уменьшая количество шаперонов, таких как GRp78 или кальретикулин. В результате накопленные неправильно свернутые белки, включая NS1, секретируются менее эффективно и могут недостаточно способствовать репликации DENV ( рис. 8 , справа).
Сообщалось, что IVM блокирует активность хеликазы DENV NS3 in vitro ( 34 ) и ядерный транспорт DENV NS5 ( 35 ). Наши данные показывают дополнительный, не исключающий друг друга, способ действия IVM на репликацию DENV: нарушение правильного сворачивания NS1, что важно как для репликации РНК DENV, так и для производства инфекционных вирусных частиц ( 6 ). Кроме того, NS1 необходим для формирования везикулярных пакетов, органеллы репликации DENV ( 5 ), на которые также может влиять IVM.
Наши результаты согласуются с недавним клиническим исследованием, демонстрирующим, что IVM ускоряет клиренс NS1 из плазмы, не влияя на виремию у пациентов, инфицированных DENV ( 18 ). Здесь мы приводим несколько доказательств того, что IVM нарушает секрецию NS1, не влияя или оказывая незначительное влияние на репликацию DENV. Предыдущие исследования показали, что IVM может блокировать репликацию DENV, но эти данные не обязательно противоречат нашим, поскольку в этих предыдущих исследованиях концентрации IVM были намного выше, или продолжительность лечения была больше, или использовались разные типы клеток ( 19 , 34–36 ) . ). Другое несоответствие возникает из-за сообщений о противовирусных эффектах in vitro, с одной стороны, и отсутствия влияния IVM на вирусную нагрузку у пациентов. Это несоответствие может быть объяснено разницей в использованных дозах ИВМ, а также разным сроком лечения препаратом. В то время как в экспериментах на клеточных культурах клетки часто обрабатывают на ранних этапах после заражения, лечение пациентов в основном происходит, когда репликация вируса находится на пике или уже снижается. В отношении вируса желтой лихорадки последовательно было показано, что добавление IVM через 22 часа после инфицирования культивируемых клеток больше не оказывало противовирусного эффекта ( 34 ).
Хотя мы могли наблюдать эффект IVM как в DENV-инфицированных клетках A549, так и в клетках Huh7, в контексте экспрессии единственного NS1 мы могли обнаружить ингибирующий эффект IVM только в A549, но не в клетках Huh7. Основная причина этого различия неизвестна, но мы отмечаем, что базальная экспрессия Grp78 была чувствительна к IVM в клетках A549, но не в клетках Huh7 ( рис. 5F и G ). Более того, мы наблюдали разную степень гликозилирования NS1, секретируемого клетками A549 и Huh7 (сравните eNS1 на рис. 1D или рис. 1G и H ). Эти результаты свидетельствуют о разной укладке/созревании NS1 в этих двух клеточных линиях или о разной кинетике секреции NS1. Более того, было показано, что секретируемый NS1 связан с нейтральными липидами ( 14 ) и может связываться с липопротеинами высокой и низкой плотности ( 37 ). Поскольку клетки Huh7 эффективно секретируют липопротеины и имеют более высокий липидный метаболизм, чем клетки A549, более эффективная загрузка липопротеинов NS1 клетками Huh7 может объяснять разницу с клетками A549.
В нашем исследовании мы также определили интерактом DENV NS1 и идентифицировали 12 клеточных белков как значительно обогащенных ( рис. 4Б ), среди них большое количество шаперонов. Мы смогли подтвердить взаимодействие NS1 с белками двух основных шаперонных систем в ЭР ( 38 ): классической шаперонной системы, включающей GRp78, и углеводсвязывающих белков, таких как кальнексин или кальретикулин. Хотя об этих взаимодействиях уже сообщалось ( 23 , 24 ), здесь мы идентифицировали новые ER-резидентные шапероны, специфически связанные с NS1, включая оксидоредуктазы PDIA3 или P4HB, что согласуется с наличием 12 консервативных остатков цистеина, образующих дисульфидные связи в NS1 ( 39 ). Кроме того, мы идентифицировали еще один кофактор сворачивания, принадлежащий к другому классу белков, CCT8, содержащий шаперонин комплекс бесхвостого полипептида 1. Этот комплекс состоит из двух сложенных друг на друга колец с центральной полостью, позволяющей сворачивать белки АТФ-зависимым образом ( 40 ). Интересно, что др. белки CCT также были идентифицированы как партнеры по взаимодействию NS1 ( 24 ), что усиливает вклад этого комплекса в сворачивание NS1.
В нашем отчете также подчеркивается новая роль UPR в жизненном цикле и патогенезе DENV. Хорошо известно, что инфекция DENV индуцирует UPR и регулирует этот путь ради собственной выгоды ( 41 ), хотя точный механизм остается неясным. UPR необходим для DENV-индуцированной аутофагии ( 42 , 43 ) и, как сообщается, предотвращает апоптоз клеток-хозяев и способствует репликации вируса ( 42 ). Кроме того, было показано, что уклонение от врожденного иммунитета зависит от пути UPR-аутофагии ( 44 ). Дополнительная роль, о которой сообщается здесь, - это вклад UPR в репликацию и патогенез DENV за счет увеличения уровня шаперонов, участвующих в правильном сворачивании NS1.
В заключение, наше исследование показывает, что ядерный транспорт UPR-индуцированных транскрипционных факторов необходим для правильного сворачивания и секреции DENV NS1. На этот путь нацелен IVM, что объясняет ускоренный клиренс NS1 из плазмы у пациентов, инфицированных DENV. Мы показываем, что этот эффект не ограничивается DENV NS1, а распространяется на невирусный гликопротеин, тем самым подчеркивая общий клеточный путь, связывающий ядерный транспорт со сворачиванием и секрецией люминальных гликопротеинов.
Спасибо всем, кто находит этот пост полезным. Подпишитесь на т/к «Так победим! Статьи»
Примечание: Все сокращение, замены и др. выполнены автором блога и не имеют никакого отношения к публикациям.(обычно в начале публикации и в заголовке). Сделано это по причине цензуры в некоторых соцсетях, которые борются с любым упоминаем ранней терапии и соответствующих лекарств.(в них идет скрин из т/к)
Отказ от ответственности: я не защищаю читателей, употребляющих иве или какие-либо другие препараты. Я не врач, а биохимик по образованию и никому не даю медицинских советов. Прежде чем принимать какие-либо лекарства, всегда консультируйтесь с лечащим врачом, которому доверяете.
ПОМНИТЕ. Вы находитесь под защитой Нюрнбергского кодекса и Хельсинской декларации. Хельсинкская декларация делает центральным документом этической исследовательской деятельности информированное согласие. Декларация определяет не только приемлемость известных и исследованных методов лечения, но принципы лечения больного альтернативными методами, к примеру, параграф 37 призван регулировать случаи, «когда не существует проверенного профилактического, диагностического или терапевтического метода. Когда существующие методы оказываются неэффективными, врач, получив обоснованное согласие пациента, должен иметь право применять непроверенные или новые профилактические, диагностические и терапевтические меры, если, по его мнению, они дают надежду на спасение жизни, восстановление здоровья или могут облегчить страдания. По мере возможности такие меры должны быть исследованы на предмет их безопасности и эффективности. Во всех случаях всю новую информацию следует регистрировать и, при необходимости, публиковать».
Полный текст ХД: https://budetlyanin108.livejournal.com/3489319.html
Подписывайтесь на мою страницу, всегда последние РКИ, КИ, обзор мировой прессы, статьи и рекомендации о передовых методах лечения К19 : https://www.facebook.com/veniamin.zaycev/
Здесь собрано все, что будет вам интересно, все объяснено в
закрепленном посте, там же есть и схема-таблица с алгоритмом и
применении иве:
https://www.facebook.com/ashominfo
Группа в фб «Так победим!» все вопросы по иве и ранней
терапии:
https://www.facebook.com/groups/293522279068895
Телеграм-канал «Так победим!» на случай потери связи, там
публикуется то, что идет в ЖЖ и не всегда идет в ФБ:
https://t.me/takpobedimsvz
Чат по иве в телеграме:
https://t.me/takpobedi
ЖЖ: https://budetlyanin108.livejournal.com/
"Книга отзывов"
часть 1: https://budetlyanin108.livejournal.com/3118230.html
часть 2: https://budetlyanin108.livejournal.com/3118949.html
часть 3: https://budetlyanin108.livejournal.com/3211902.html
часть 4: https://budetlyanin108.livejournal.com/3417765.html
Ссылки по детоксикации спайк-белка:
https://budetlyanin108.livejournal.com/3144742.html
https://budetlyanin108.livejournal.com/3260643.html
https://budetlyanin108.livejournal.com/3596796.html
Детокс аутофагией:
https://budetlyanin108.livejournal.com/3613550.html
Назальные спреи
https://budetlyanin108.livejournal.com/3612201.html
РУБРИКАТОР чата Телеграм-канала «Так победим!»
Как выбрать идеальный редуктор хода для мини-экскаватора 
10 популярных мифов о самолетах 
Егор Небо "Домик для пешки" 
Судя по всему, в шоу-бизнесе назад дороги нет 
Кризис в Окленде: Шокирующие изображения показывают лагеря бездомных в мрачном 
Покушение на Трампа в Пенсильвании. В США даже в президентов стрелять уже 
«Время метрополий истекло!». Медведев написал статью о неоколониализме Запада и 
Интересное применение термина "раскулачивание" 
Зелёненький он был... 
